帕金森病動物模型

自發(fā)現(xiàn)以來，6-OHDA一直在帕金森病的臨床前研究中扮演著重要角色。由Ungerstedt和Arbuthnott在1970年共同創(chuàng)立的單側(cè)注射旋轉(zhuǎn)模型成為了在模式動物上被最為廣泛使用的帕金森模型之一。

6-羥多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）是多巴胺的羥基化衍生物，因其化學(xué)結(jié)構(gòu)與DA類似，因此能夠同DA競爭攝取位點(diǎn)，進(jìn)而被攝入胞內(nèi)。進(jìn)入胞內(nèi)后，6-OHDA能夠被氧化分解，產(chǎn)生活性氧，通過MAO（單胺氧化酶）進(jìn)一步產(chǎn)生氧自由基，或直接引起線粒體功能障礙，導(dǎo)致DA能神經(jīng)元死亡。

因其造成動物的生物化學(xué)和神經(jīng)化學(xué)損傷類似于PD，故常被用于誘導(dǎo)動物PD模型。

由于6-OHDA不能穿透血腦屏障，因此為了達(dá)到中樞神經(jīng)系統(tǒng)毀傷的效果，在使用6-OHDA進(jìn)行帕金森造模時(shí)，需要直接注射入動物腦內(nèi)，才能損傷中樞神經(jīng)元。

通過使用腦li體定wei注射技術(shù)將6-OHDA注射到前腦內(nèi)側(cè)束（其向前腦傳遞多巴胺能和5-羥色胺能投射）或紋狀體靶向黑質(zhì)紋狀體多巴胺能途徑來獲得帕金森模型大鼠。【具體的注射位點(diǎn)可以是黑質(zhì)致密部（substantia nigra pars compacta, SNpc）、紋狀體（striatum）或者位于二者之間的前腦內(nèi)側(cè)束（MFB）。】

可以進(jìn)行單側(cè)造模與雙側(cè)造模，其中單側(cè)造模可以提高動物耐受力，并可以將正常側(cè)作為內(nèi)部控制組與造模側(cè)進(jìn)行對照研究，以便于更好地區(qū)分正常與異常運(yùn)動區(qū)并評估損傷引起的運(yùn)動缺陷。

帕金森病動物模型造模方法：

①SD大鼠適應(yīng)一周后，腹腔麻醉，將麻醉后大鼠固定于腦li體定向儀上。

②剪開頭皮后用棉簽輕輕擦拭顱骨表面，將前囟（bregma）和后囟（lambda）點(diǎn)暴露出來。

③調(diào)節(jié)立li定wei儀，將前囟和后囟點(diǎn)的高度調(diào)節(jié)到一致。以前囟（Bregma）點(diǎn)為原點(diǎn)，找到注射位點(diǎn)所在的坐標(biāo)

④用顱骨zuan沿注射坐標(biāo)位點(diǎn)鉆孔，以保證微量注射器進(jìn)針時(shí)不碰到孔壁。使用微量注射器吸取6-OHDA（注意避光），緩慢插入注射位點(diǎn)，以0.5ul/min的速度將6-OHDA注射到目標(biāo)腦區(qū)，注射劑量為4μl。

帕金森病動物模型驗(yàn)證：

由于動物行為特異性差異，判斷大鼠帕金森病模型是否成功，通常以動物出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)行為的次數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)，一般超過7轉(zhuǎn)/min即為成功的帕金森病模型，否則為不成功模型。

這類模型優(yōu)點(diǎn)是注射靶位選取靈活，注射劑量可調(diào)，動物行為變化穩(wěn)定可靠，檢測量化性好，多用于PD的臨床前藥物研究和藥理療效判定、神經(jīng)保護(hù)、細(xì)胞移植和基因治療等方面的研究。

缺點(diǎn)是①神經(jīng)元的毀損出現(xiàn)的較早，這與臨床PD病人的中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的漸進(jìn)性死亡不同；②近距離的毀損很難把握毀損的程度，這使得采用這種方法獲取部分損毀的模型的成功率很低；③小鼠在異常不自主運(yùn)動嚴(yán)重程度方面表現(xiàn)出較大的變異性，這會加大實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的不穩(wěn)定性。