一、基礎染色技術

1. HE染色(蘇木精-伊紅染色)

• ?原理?：蘇木精(堿性染料)與帶負電荷的DNA結合染藍紫色細胞核；伊紅(酸性染料)與帶正電荷的蛋白質結合染粉紅色細胞質
  

• ?流程?：

1. 樣品制備：細胞接種于含蓋玻片的培養瓶，CO?培養箱培養至單層
   

2. 固定：95%乙醇固定15分鐘，PBS洗滌
   

3. 核染色：蘇木精染5-10分鐘→鹽酸乙醇分色→氨水藍化
   

4. 質染色：伊紅染5-10分鐘
   

5. 脫水透明：梯度乙醇脫水，二甲苯透明
   

6. 封片觀察：中性樹膠封固，光鏡觀察
   

2. 熒光染色技術

• ?鬼筆環肽染色?：標記微絲結構，FITC標記后與DAPI核染色配合使用
  

• ?線粒體染色?：使用MitoTracker系列染料，利用線粒體膜電位特性特異性標記
  

二、實驗操作要點

1. 通用流程

1. ?細胞準備?：以2-10×103 cell/coverslip密度接種，培養48小時
   

2. ?固定?：3.7-4%甲醛/PBS室溫固定10分鐘
   

3. ?穿膜?：0.1% Triton X-100 + 0.1M Glycine冰上處理30分鐘
   

4. ?封閉?：5mg/ml BSA室溫封閉1小時
   

5. ?染色?：根據目標結構選擇特異性染料

2. 活死細胞染色

• 使用Calcein AM(標記活細胞)和PI(標記死細胞)雙染

• 共聚焦顯微鏡觀察

三、前沿技術發展

最新研究開發了"數字孿生"技術，通過AI驅動的3DCellScope系統實現類器官高速3D分析，突破傳統染色方法的局限
。該方法能：

• 多級分割(細胞核/細胞/類器官)

• 量化3D形態學和拓撲學特征

• 無需復雜染色即可分析微重力等條件下的細胞響應

四、注意事項

• 染料工作濃度需精確配置

• 不同結構需要匹配特定染料(如DAPI染核，MitoTracker染線粒體)

• 染色時間影響結果質量，通常30-60分鐘

• 保持pH穩定(如HE染色需pH6.7-6.8)