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AO/EB染色實驗是一種通過熒光染料區分細胞存活狀態的經典方法，主要用于細胞凋亡與壞死的鑒別
。以下是實驗關鍵信息：
?染料特性?
?AO（吖啶橙）?：穿透完整細胞膜，與DNA結合發綠色熒光，與RNA結合發紅色熒光
?EB（溴化乙錠）?：僅進入膜損傷細胞，與DNA結合發橘紅色熒光
?染色結果判讀?
?細胞處理?
誘導凋亡后消化細胞，制備1×10?/mL單細胞懸液
?染色操作?
取25μL細胞懸液，加入2μL AO（100μg/mL）和2μL EB（100μg/mL）
混勻后滴片，加蓋玻片避光孵育1分鐘
?觀察記錄?
熒光顯微鏡下20分鐘內計數500個細胞（藍光激發綠熒光，綠光激發紅熒光）
?染色控制?
AO/EB終濃度建議50μg/mL，避免過度染色
需設置未處理細胞對照和凋亡誘導陽性對照
?結果分析?
早期凋亡需與活細胞區分：觀察核固縮形態
壞死細胞表現為細胞體積增大和熒光彌散
肝癌細胞凋亡檢測中，AO/EB染色與TUNEL法結果一致性較高
骨肉瘤細胞凋亡研究中，該方法可定量分析不同凋亡階段細胞比例
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